hMMS2基因对结肠癌细胞耐药逆转的影响

摘要

为探讨hMMS2(Human methyl methanesulfonate sensitive mutant 2)基因对人结肠癌细胞耐药逆转的影响,文章以人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞(THC8307/L-OHP)为实验材料,采用脂质体-质粒转染技术构建了带有干扰目的基因hMMS2的miRNA片段并携带绿色荧光蛋白标记重组质粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-MMS2)的细胞系,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫荧光技术(Immunostaining technique)检测该细胞系的干扰效率.选择hMMS2低表达具有统计学意义的上述细胞系作为实验组细胞,同时将未曾作过处理的THC8307/L-OHP细胞作为空白对照组,转染绿色荧光蛋白空质粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR)的THC8307/L-OHP细胞作为阴性对照组,以噻唑蓝比色分析实验(MTT colorimetric analysis assay)、克隆形成实验(Colony formation assay)对3组细胞的存活率和克隆形成率进行检测,结果显示:实验组细胞的奥沙利铂半数抑制浓度(Half inhibition concentration,IC50)、耐药指数(Resistance index,RI)及克隆形成率(Colony-forming efficiency,CFE)均比对照组细胞明显降低(P＜0.05),而相对逆转率(Relative reverse efficiency,RRE)增高(P＜0.05),提示实验组细胞增殖能力减弱;以罗丹明123实验(Rhodamine 123 assay)结合倒置荧光显微镜、流式细胞仪检测技术等观测细胞的凋亡变化,结果显示,实验组细胞的凋亡率较对照组细胞显著增高(P＜0.05);两对照(空白、阴性)组间并无细胞增殖或凋亡的显著性差异.研究结果提示:下调hMMS2基因表达可逆转人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞对L-OHP的耐药性并促进结肠癌细胞的凋亡.