亲和层析纯化重组中性粒细胞激活蛋白

摘要

目的:直链淀粉树脂亲和层析法分离纯化重组麦芽糖结合蛋白-中性粒细胞激活蛋白(recombinant maltose-binding protein-neutrophil-activating protein,rMBP-NAP).用于支气管哮喘模型小鼠进行免疫调节实验.方法:IPTG诱导基因工程菌E.coli TB1 (pMAL-c2X-nap)表达rMBP-NAP,离心收获细胞,过柱缓冲液重悬菌体并超声破碎,再次离心取上清和沉淀,SDS-PAGE分析rMBP-NAP可溶性；直链淀粉树脂亲和层析法分离纯化rMBP-NAP;SDS-PAGE凝胶扫描分析纯化后rMBP-NAP纯度；蛋白定量试剂盒测定rMBP-NAP浓度.结果:IPTG诱导工程菌表达的rMBP-NAP主要以可溶性形式存在于超声上清中,相对分子质量约为57kD,与预期结果一致；亲和层析法纯化rMBP-NAP纯度可达96.5％,浓度可达0.625g/L.结论:用直链淀粉树脂亲和层析法,可纯化得到高纯度、高浓度的融合蛋白rMBP-NAP.