食品中单核细胞增生李斯特菌荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用

摘要

目的利用荧光定量PCR检测技术，建立食品中单核细胞增生李斯特菌污染的快速敏感特异的检测方法。方法以单增李斯特菌的特异性DNA核酸片段作为靶序列，采用聚合酶链反应（PCR）结合Taqman技术，以2011年食源性致病菌监测分离到的菌株作为阳性菌，提取核酸DNA作为模板，对其进行荧光检测；同时以单增李斯特菌和其它6种相关细菌进行检测，以考核检测体系的符合性、特异性和灵敏性，并初步应用于样品的检测。结果本研究建立的反应体系对7株单增李斯特菌呈现出良好的扩增曲线，具有较高的符合性，在6株相关细菌的检测中，除单增李斯特菌结果为阳性外，其余菌株均为阴性；在纯菌的条件下，定量检测低限为150cfu／ml：检测样品结果显示荧光定量PCR方法较传统方法敏感、快速、准确、特异。结论该方法特异性强、灵敏度高、稳定性好，操作简便快速，适应于食品微生物检验发展需要及食物中毒样品的快速检测，具有较大的推广及应用价值。