荧光定量PCR快速检测食品中沙门氏菌方法的建立及初步应用

摘要

根据鼠伤寒沙门氏菌编码肠毒素的stn基因核苷酸序列设计一对引物和荧光探针，通过对荧光定量PCR反应体系和反应条件的摸索，初步建立了鼠伤寒沙门氏菌核酸的荧光定量PCR(Real-time PCR)检测方法。将本检测方法进行了敏感性试验和特异性试验，最后对人工染菌的食品进行模拟检测。灵敏性试验结果显示，该检测方法的灵敏度最高能检测到100个拷贝/μL的质粒；特异性试验结果显示，5株沙门氏菌均显阳性，而8株非沙门氏菌均显阴性。模拟检测结果显示当各食品中初始含菌量分别为1cfu/g(鲜猪肉)和1cfu/g(鲜鸡蛋)时，经过12h的增菌，用该套建立的荧光定量PCR方法检测均为阳性。由此建立了检测食品中沙门氏菌的荧光定量PCR检测方法，该方法简便、快速、特异性好、灵敏度高，本研究为研制快速检测食品中的沙门氏菌的试剂盒打下了良好的基础。