婴儿双歧杆菌/重组人核心蛋白聚糖肿瘤靶向性基因治疗系统的构建

摘要

目的 构建双歧杆菌表达重组人核心蛋白聚糖(rhDCN)基因载体.方法 利用pGEX-4T-1 原核载体系统,用EcoRΙ和NotΙ酶对PCR 扩增后DCN 基因和PGEX-4T-1 质粒分别进行双酶切,琼脂糖电泳凝胶分离并用凝胶重回收试剂盒回收酶切的1.1kbp 和5.0kbp 两个目的 片段.T4 DNA 连接酶连接,构建成PGEX-4T-1-DCN 重组质粒.电穿孔法将重组质粒转化婴儿双歧杆菌,挑选阳性克隆菌落,提取质粒,双酶切鉴定及测序验证分析.结论 成功构建婴儿双歧杆菌/rhDCN 肿瘤靶向性基因治疗系统.