婴儿双歧杆菌/胞嘧啶脱氨酶肿瘤靶向性基因治疗系统的构建

摘要

目的构建婴儿双歧杆菌/胞嘧啶脱氨酶靶向性基因治疗系统.方法 PCR扩增CD基因,EcoR Ⅰ,BamH Ⅰ对CD基因和pGEX-1LamdaT质粒同时进行双酶切,获得4.9 kb、1.3 kb两个DNA片段.T4 DNA连接酶连接这两个片段构建重组的CD/pGEX-1LamdaT质粒,然后用电穿孔法将重组质粒转染婴儿双歧杆菌.从阳性转染的婴儿双歧杆菌中提取重组质粒,双酶切后检测切取片段长度,采用Sanger双脱氧链终止法对提取的重组质粒中的插入片段进行测序.结果从阳性转染的婴儿双歧杆菌中获得了6.2 kb大小的重组质粒,该质粒经双酶切后,得到了4.9 kb和1.3 kb两个长度的片段,其长度分别与pGEX-1LambdaT及CD基因的长度相同.测序结果显示,提取的重组质粒中插入的基因片段全长及核苷酸序列与CD基因完全相同.结论外源性CD基因被准确插入pGEX-1LambdaT质粒并转入婴儿双歧杆菌中,婴儿双歧杆菌/胞嘧啶脱氨酶靶向性基因治疗系统被成功构建.