丙型肝炎病毒NS3－4A蛋白对MMP－9及天然免疫的影响

摘要

目的：探讨HCV 编码的NS3－4A 蛋白对MMP－9表达的调节作用。方法利用Primer Premier 5.0软件设计相关引物，构建在相应的载体上；使用PCR 扩增目的基因；PCR产物以及双酶切产物的胶回收；冷氯化钙法制备感受态细胞；YC 法转化感受态细胞；进行细胞培养基的配制；之后进行RT－PCR 反应。结果在Huh7.5.1细胞内，内源性的MMP－9可以被NS3－4A 蛋白上调表达；转染了pCMV－tag2A－NS3－4A 质粒的Huh7.5.1细胞与未转染的细胞相比，其内源性MMP－9的表达可以明显被NS3－4A 蛋白上调。在Huh7.5.1细胞中，IFN－α可以增促进MMP－9基因mRNA的表达，且这种增强作用呈现出剂量依赖性；在转染了pCMV－tag2B－MMP－9质粒的Huh7.5.1细胞中，其内源性IFN－α及其受体IFNAR1和IFNAR2的表达可以被MMP－9蛋白抑制，且对IFN －α及 IFNAR1的抑制作用具有较明显的剂量依赖性；向转染了 pCMV －tag2B 质粒的Huh7.5.1细胞中加入IFN－α可以上调其内源性的PKR和OAS2的表达，而MMP－9又可以抑制这些基因的表达，这反过来也说明MMP－9可以抑制IFN－α及其受体IFNAR1和IFNAR2的表达，进而抑制IFN－α下游PKR和OAS2的表达；IFN－α可以上调Huh7.5.1细胞中内源性的PKR和OAS2的表达，而MMP－9又可以抑制这些基因的表达，这与之前mRNA水平的检测结果相一致。结论在HCV 的感染过程中，NS3－4A 蛋白可以促进细胞内源性IFN－α的表达，而IFN－α的高表达又会导致MMP－9的高表达，MMP－9反过来又会抑制IFN－α及其受体IFNAR1和IFNAR2的表达水平，进而抑制IFN－α下游的PKR及OAS2基因。