ERK1/2通路在Peroxiredoxin－1抑制TGF－β1诱导的肺成纤维细胞增殖中的作用

摘要

目的：探讨细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）在新型过氧化物酶Peroxiredoxin－1（Prx－1）抑制转化生长因子－β1（ TGF－β1）诱导的肺成纤维细胞增殖中的作用。方法体外培养肺成纤维细胞，随机分为对照组、TGF－β1组、阴性转染组、Prx－1 siRNA转染组。各组细胞用0.4％血清培养12 h使其同步化。 TGF－β1组、阴性转染组和Prx－1 siRNA转染组均添加5μg／L TGF－β1刺激24 h，阴性转染组和Prx－1 siRNA转染组分别利用脂质体Lipo2000将干扰siRNA和Prx－1 siRNA转染到肺成纤维细胞，培养48 h。 Real－time PCR检测转染后Prx－1 mRNA表达；MTT检测细胞增殖、Western blot检测ERK1／2及Prx－1表达、2，7－二氯荧光素二乙酸（ DCFH－DA）检测活性氧（ ROS）水平。结果 Prx－1 siRNA转染肺成纤维细胞后，Prx－1 mRNA表达明显降低，最大抑制率为92％。与对照组比较，TGF－β1组的细胞增殖、ROS、磷酸化ERK1／2（p－ERK1／2）及Prx－1蛋白的表达水平均明显增加。与TGF－β1组比较，阴性转染组中的上述观察指标无明显变化，但Prx－1 siRNA转染组的细胞增殖、ROS、p－ERK1／2的水平明显上升，而Prx－1蛋白的表达被抑制。结论 TGF－β1能够诱导肺成纤维细胞生成ROS，并由此促进ERK1／2的激活，最终导致细胞增殖，而Prx－1 siRNA则可通过增加ROS水平进一步促进TGF－β1的作用。