ERβ真核表达质粒对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的影响及p38信号通路的作用

摘要

目的 探讨雌激素受体β(ERβ)真核表达质粒对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的影响,以及p38信号通路在其中的作用.方法 实验分为4组:空白对照组,未加入任何处理因素;阴性对照组,转染空质粒pCDNA-3.1;pCDNA-3.1-ERβ组(ERβ组),转染重组质粒pCDNA-3.1-ERβ;pCDNA-3.1-ERβ+ p38抑制剂SB203580组(ERβ+ SB203580组),转染重组质粒pCDNA-3.1-ERβ的LNCaP细胞中加入10 μ,moL/L的p38信号通路抑制剂SB203580,作用48 h.Western blot检测各组p38蛋白活化以及cyclin D1、Bcl-2和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达;应用流式细胞检测细胞周期和凋亡;应用软琼脂集落形成实验和细胞划痕实验检测细胞的集落形成能力和细胞迁移能力;应用Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力.结果 酶切鉴定和测序分析表明完成了ERβ的扩增和pCDNA-3.1-ERβ重组质粒的构建.Real-time PCR及Western blot结果显示成功转染并筛选出稳定高表达ERβ的LNCaP细胞系.Western blot结果显示4组p38总蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).磷酸化p38表达ERβ组最高、ERβ+ SB203580组最低.ERβ+ SB203580组cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达明显高于其他3组,ERβ组最低.流式细胞周期检测结果显示Go/G1期细胞比例ERβ组最高、ERβ+ SB203580组最低.流式细胞凋亡检测结果显示细胞凋亡率ERβ组最高、ERβ+ SB203580组最低.软琼脂集落形成实验结果显示集落数ERβ+ SB203580组最多,ERβ组最少.划痕实验结果显示细胞迁移率ERβ+SB203580组最高,ERβ组最低.Transwell侵袭实验结果显示穿膜细胞数ERβ+ SB203580组最多,ERβ组最少.结论 ERβ可通过激活p38信号通路抑制前列腺癌LNCaP细胞的恶性生物学行为.