RNAi沉默PSMA基因对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的影响

摘要

目的:构建LNCaP细胞PSMA基因的shRNA真核表达载体,探讨其对LNCaP细胞中PSMA基因表达的干扰作用.方法:针对PSMA mRNA序列设计合成3对编码shRNA的寡核苷酸链,退火形成双链,连接入含有BamH I和HindⅢ酶切位点的pSilencer 2.1-U6-neo真核表达载体,双酶切及测序鉴定.使用脂质体转染的方法将重组质粒导入LNCaP细胞,G418筛选后RT-PCR、Western blotting检测其对PSMA基因干扰作用,并观察对LNCaP细胞生物学行为的影响.结果:经酶切及测序鉴定,成功构建shRNA 真核表达载体p-shRNAI,2,3转染LNCaP后,对细胞PSMA mRNA表达抑制率分别为33.15%、9.26%、41.97%,Western blotting结果显示对PSMA蛋白表达的抑制率分别为26.26%、6.47%、40.69%.选择抑制效率较高的P-shRNA3进行体外生长及侵袭力实验,发现干扰后对LNCaP细胞侵袭力增强,但是对细胞生长影响不大.结论:成功构建了人PSMA基因的RNAi的真核表达载体,并在LNCaP细胞中有效地发挥了对PSMA基因表达的十扰作用,初步发现PSMA在前列腺癌的侵袭中起负向调节作用,为进一步研究PSMA的生物学功能,探索前列腺癌的发病机制奠定一定的实验基础.