转染hTERT基因对人角膜内皮细胞增殖及功能维持的影响

摘要

目的 探索转染人端粒酶催化亚单位(TERT)促进人角膜内皮细胞(HCECs)增殖并进行长期培养的可行性.方法 原代HCECs生长到80％融合时,采用脂质体介导的方法将质粒pEGFP-N1和pBABE-puro-hTERT转染到HCECs,1μg/mL嘌呤霉素筛选.RT-PCR和Western blot检测嘌呤霉素耐药克隆中TERT的表达情况.阳性克隆进行传代培养.MTT法和细胞周期检测比较细胞的生长增殖能力;透射电镜检测细胞的超微结构,RT-PCR检测泵功能相关基因的表达,Western blot检测Na+/K+-ATPase α1的表达,免疫荧光检测ZO-1、N-cadherin的表达.结果 TERT-HCECs表达了外源的TERT已经传到36代,保持了正常的HCECs形态且比HCECs具有更强的增殖能力;泵功能相关基因、Na+/K+ ATPase α1、ZO-1的表达在TERT-HCECs和HCECs中差异无统计学意义.TERT-HCECs能形成单层结构,并保持与原代HCECs细胞相似的泵功能.结论 通过转染TERT,建立了一株与原代生理功能相近且具有更强增殖能力的TERT-HCECs.