重组米曲霉丝氨酸羧肽酶O的性质鉴定及脱苦应用研究

摘要

为了研究羧肽酶在蛋白水解及对蛋白水解物脱苦中的重要作用,利用毕赤酵母表达系统对米曲霉(Asperigillus oryzae)羧肽酶O(carboxypeptidase O,OcpO)进行表达.重组米曲霉羧肽酶O(rOcpO)经过分子筛和离子柱纯化,对其进行脱糖基化及酶学性质的检测研究.结果表明,该蛋白酶是以糖蛋白的形式进行表达,分子量约为74 ku,脱糖基化后的相对分子质量约为56 ku,产量约为20.4 nKat/mL.该蛋白酶是一种酸性蛋白酶,最适pH值为4.0,且在pH 3.0～6.0时保持稳定;最适温度约为40℃,具有良好的热稳定性,在60℃孵育1h后仍能保持63％的酶活;PMSF能够显著抑制该酶酶活,证明其为丝氨酸羧肽酶.通过rOcpO对大豆蛋白和酪蛋白的Alcalase蛋白酶水解物的进一步水解研究发现,rOcpO水解对两种水解液的苦味均有明显减轻,并且水解度有明显升高.