小鼠胚胎干细胞成纤维细胞液养层的制备

摘要

采用受孕12.5 d、13.5 d、14.5 d的ICR品系小鼠的胚胎制备原代成纤维细胞,在相同条件下观察不同胚龄胚胎成纤维细胞的增殖情况.结果表明受孕13.5 d胚胎为分离小鼠胚胎原代成纤维细胞的最适胚龄.分离出的原代成纤维细胞在37℃时,用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化组织的时间为3 min,可在培养3 d后传代.F1代和F2代较F3代成纤维细胞分泌的抑制干细胞分化因子LIF的量要多.小鼠胚胎成纤维细胞冻存于-135℃～-150℃10个月,复苏后能正常传代.丝裂霉素-C抑制胚胎成纤维细胞增殖的最适浓度为10 μg/105细胞,作用时间为2.5 h,丝裂霉素-C处理过的胚胎成纤维细胞可以在12 d内即不增殖也不死亡,但在6 d内使用效果最佳.