慢性应激对大鼠脾脏能量代谢及细胞免疫功能损伤和醒脾解郁法的干预机制研究

摘要

目的 阐明慢性应激对大鼠脾脏能量代谢和细胞免疫功能的影响及醒脾解郁法干预的作用机制.方法 选取96只Wistar雄性大鼠随机分为6组,即空白对照组、模型组、阳性药(盐酸舍曲林)组及醒脾解郁低、中、高剂量组,每组分为慢性应激4周和8周两个时间点.采用慢性不可预见性温和应激方法建立抑郁症肝郁脾虚大鼠模型,在造模的同时给予醒脾解郁方.分别在应激刺激的第4周和第8周每组处死8只动物,分别取大鼠脾脏.采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测脾脏中ATP含量;提取脾脏线粒体,采用分光光度法检测线粒体膜电位,线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ的活性.采用ELISA法检测大鼠脾脏中趋化因子CCL22、CXCL10含量;ELISA法检测大鼠脾脏中白介素-2(interleukin 2,IL-2)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白介素-4(interleukin 4,IL-4)、白介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、白介素-10(interleukin 10,IL-10)含量.结果 慢性应激第4周时,大鼠脾脏组织中三磷酸腺苷酸(adenosine triphosphate,ATP)含量、线粒体膜电位以及线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ的活性均无显著变化(P>0.05);在慢性应激第8周,大鼠脾脏ATP含量、线粒体膜电位和线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ活性均显著下降(P<0.01).醒脾解郁方干预8周后,可显著提高脾脏中ATP水平、线粒体膜电位和线粒体呼吸链复合物I、II、IV的活性(P<0.05或P<0.01).在应激第4周,大鼠脾脏中趋化因子CCL22和CXCL10、细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-1β水平均显著升高(P<0.01),而IL-4和IL-10水平则显著降低(P<0.05或P<0.01);慢性应激第8周时,大鼠脾脏CCL22、CXCL10、IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-10均显著降低(P<0.01),而IL-1β持续显著高表达(P<0.01).醒脾解郁方干预4周后,可以显著降低IL-2、IFN-γ、IL-1β水平(P<0.05或P<0.01),提高IL-4和IL-10的水平(P<0.05或P<0.01);干预8周后,醒脾解郁方可以显著提高CCL22、CXCL10、IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平(P<0.05或P<0.01),降低IL-1β的表达(P<0.01).结论 慢性应激可以导致大鼠脾脏线粒体功能损伤和能量代谢障碍,造成脾脏炎症反应和细胞免疫功能损伤为特征的免疫失调.醒脾解郁方可以显著改善慢性应激导致的脾脏线粒体损伤及能量代谢障碍,抑制脾脏炎症反应及改善细胞免疫功能.