人Lipocalin型前列腺素D合酶的克隆表达及其抗体制备

摘要

目的研究人Lipocalin型前列腺素D合酶(L-PGDS)的编码蛋白质在大肠杆菌中的表达，进一步制备抗L-PGDS编码蛋白质的多克隆抗体。方法用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法克隆L-PGDS基因蛋白编码序列。构建该基因的表达质粒，在大肠杆菌中诱导表达，SDS-PAGE分析表达的蛋白质。用RediPackGST亲和层析柱纯化的蛋白质免疫BALB/c小鼠制备多抗。结果RT-PCR所分离的L-PGDS基因蛋白编码序列，经测序证明与基因库所报道的L-PGDS的基因序列完全一致。SDS-PAGE分析证实该基因编码的蛋白质在大肠杆菌中表达，并获得效价为1∶6400的多克隆抗体。结论L-PGDS基因编码蛋白质能够在原核细胞中表达，并能获得抗L-PGDS基因编码蛋白质的多克隆抗体，为进一步深入研究该蛋白质的结构与功能打下了基础。