呋喃它酮代谢物单链抗体制备和酶联免疫分析方法

摘要

从呋喃它酮代谢物5-吗琳甲基-3-氨基-2-恶哩烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因,通过(G1y4Ser)3连接肽采用重叠延伸聚合酶链式反应技术构建单链抗体基因,pET-22b(+)表达载体进行表达,Ni亲和柱进行纯化,制备得到抗AMOZ衍生物单链抗体,采用棋盘滴定实验优化包被原包被浓度和单链抗体稀释度,建立基于此单链抗体的AMOZ残留间接竞争酶联免疫分析方法并对方法进行评价.结果表明:最佳包被抗原质量浓度和单链抗体稀释度分别为0.062 5 μg/mL和20倍;建立的间接竞争酶联免疫分析方法半抑制浓度为8.65 μg/L,线性范围为2.90?53.28 μg/L,检测限为1.48 μg/L;除与原药呋喃它酮有交叉反应外,此单链抗体与其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物交叉反应率均小于0.1％,虾肉样品添加回收率为74.3％?86.6％;用高效液相色谱-串联质谱法对免疫测定结果进行确证实验,两种方法相关性良好(R2=0.9992),说明建立的间接竞争酶联免疫分析方法可用于虾类等水产品中AMOZ残留的快速筛查.