基于CRISPR-Cas9系统的Saccharomyces cerevisiae基因删除

摘要

建立CRISPR-Cas9介导的在Saccharomyces cerevisiae双倍体细胞中进行基因敲除的方法.以can1基因敲除后的表型验证该CRISPR-Cas9系统的有效性,can1基因的失活效率达到4％.利用该系统又分别敲除Tpdc、adh3、adh2、adh1、pdh等基因,单基因编辑效率分别为4/48、3/48、1/48、3/28、1/16.确定了基因连续敲除的方法流程,pdc、adh3、adh2三个基因全部敲除,整个过程用时17d.探索了双基因一次转化同时敲除的方法,将adh5、lip两个基因同时敲除用时6d,基因编辑效率分别为9/32和10/32.