具纤溶活性菌株ND2的筛选及其纳豆激酶基因的克隆、表达

摘要

从市售的纳豆制品中分离并纯化出一株具有高效纤溶活性的菌株ND2,经生理生化特性及16srRNA序列分析鉴定为芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌.通过正交试验优化菌株ND2的发酵条件,得到ND2产纳豆激酶的最佳条件:氮源-大豆蛋白胨,碳源-淀粉,碳氮比3∶1,37 ℃,pH6.0.经PCR扩增得到825 bp的纳豆激酶成熟肽基因,采用pET32a(+)表达载体和BL21(DE3)为宿主菌,在温度为37 ℃、1‰IPTG浓度下可诱导获得较高表达量的重组纳豆激酶.