高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达

摘要

本研究以本实验室曾在酒曲、酒糟、窖泥等样品中分离的具有酱香味的13株菌株作为出发菌株,经脱脂奶粉平板、纤维蛋白双层平板筛选出纤溶酶活性最高的菌株GZHZV-8,结合形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析,GZHZV-8菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).以GZHZV-8菌株总DNA为模板扩增出纤溶酶基因的编码区,与pMD18-T载体连接、转化至大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,分析表明纤溶酶基因开放阅读框包含1092 bp碱基,编码363个氨基酸.纤溶酶基因与表达载体pET-22b(+)连接转化至E.coli BL21中表达,表达菌株经IPTG诱导表达分泌活性纤溶酶,培养后测得发酵上清液、菌体细胞破碎上清液和菌体细胞破碎沉淀的纤溶酶活力分别为613.26 IU/mL、407.38 IU/mL、993.12 IU/mL.