纳豆激酶基因的克隆及其在枯草杆菌中的表达

摘要

为研究纳豆激酶(nattokinase, NK)的生物化学性质, 以纳豆芽孢杆菌基因组DNA为模板, PCR扩增包含启动子及3′端非翻译区的纳豆激酶全长基因序列, 经鉴定后构建大肠杆菌-枯草杆菌穿梭表达质粒pBLNK, 转化蛋白酶缺陷型枯草杆菌, 筛选表达菌株. 表达株培养15 h后收集培养上清液, SDS-PAGE分析证实表达产物后, 用超滤浓缩、分子筛、离子交换等步骤分离纯化重组NK, 每升发酵液得纯度达95%的重组NK约100 mg, 比活性达12 000 u/mg.