裂殖壶菌鲨烯合酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

摘要

为探讨裂殖壶菌烯合酶基因的克隆,以及在大肠杆菌中的表达.采用简并引物与RACE相结合的方法从裂殖壶菌(Schizochytrium limacinum)中克降出鲨烯合酶基因.分析表明该基因的cDNA全长包括1672个核苷酸,编码一个含446个氨基酸的开放阅读框;在裂殖壶菌中以单拷贝的形式存在.同源分析显示裂殖壶菌鲨烯合酶的氨基酸序列中含有5个保守基序.将裂殖壶菌鲨烯合酶的cDNA序列连接到原核表达载体pGEX-4T-3上构建融合表达载体,并在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE及Western blotting分析结果显示,诱导表达出的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,其相对分子质量与预期相符;且融合蛋白具有一定的免疫原性.