重组大肠杆菌合成光学纯L-苯基乳酸

摘要

以巨大芽孢杆菌Z2013513基因组DNA为模板,分别PCR扩增得到L-乳酸脱氢酶基因(ldhL)和葡萄糖脱氢酶基因(gdh),将gdh与ldhL分别连接至表达载体pETDuet,获得共表达质粒pETDuet-ldhL-gdh.经转化和验证获得重组菌大肠杆菌BL21 (DE3) /pETDuet-ldhL-gdh.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和比酶活力分析表明重组蛋白L-乳酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶均成功表达且具有酶活力.在37℃、200r/min条件下,经60 min反应,催化底物苯丙酮酸合成24.26 mmol/LL-苯基乳酸.产物L-苯基乳酸光学纯度(＞99％),底物摩尔转化率(59.55％),结果表明此重组体系可用于高效合成高光学纯L-苯基乳酸.