基于琼脂扩散法的抗菌肽定量测定方法优化

摘要

抗菌肽在试验室研究、生产实践以及安全性评价过程中,存在定量测定方法不统一,结果重复性差,缺乏比较依据等问题.以硫酸多粘菌素B为代表,以铜绿假单胞菌为指示菌,采用琼脂扩散法建立抗菌肽浓度对数值与抑菌圈直径之间的线性关系,以重复性和精密度为指标,对指示菌菌龄、菌浓、琼脂浓度和培养基厚度等影响因素进行优化,确定琼脂扩散法测定抗菌肽效价的最佳测定条件为:指示菌的最佳培养时期为稳定期,浓度为106 cfu/mL,培养基厚度为3.15 mm(Φ90 mm,20 mL),琼脂浓度为1.5%.在此条件下,选用其它抗菌肽和指示菌进行验证,结果重复性好,精密度高(R2=0.997),该研究将为抗菌肽在试验和生产过程中的定量测定提供参考和依据.