副溶血性弧菌和溶藻弧菌的双重PCR检测技术

摘要

主要针对副溶血性弧菌(Vp BJ1997)和溶藻弧菌(Va ATCC17749)的gyrB基因的不同位点设计特异性引物,利用双重PCR技术同时检测Vp(B J1997)和Va(ATCC17749),并对该反应体系的特异性以及灵敏度进行检测.结果显示Vp(BJ1997)灵敏度的检测下限可达2×102 CFU/mL,Va(ATCC17749)灵敏度的检测下限可达2.03×102 CFU/mL,双重PCR与单一PCR检测的灵敏度的数量级是相同的;与沙门氏菌(ATCC27892)、金黄色葡萄球菌(ATCC13565)、大肠杆菌(35218)、河弧菌(H265)、鳗弧菌(M936)、创伤弧菌(ATCC27562)无交叉反应;在人工污染试验中,混合菌液的检测下限2.84×103 CFU/mL,而进一步稀释至2.84×102 CFU/mL时,Vp(BJ 1997)已检测不出,Va(ATCC17749)仍可检出.研究表明,该方法特异性强,灵敏度高,操作简单,成本低,检测速度快,为基层单位同时检测副溶血性弧菌和溶藻弧菌提供了一种快速准确的方法,对控制水产品中这两种致病性弧菌具有重大的意义.