白酒中邻苯二甲酸二乙酯的化学发光酶联免疫分析方法

摘要

以邻苯二甲酸二乙酯(diethyl phthalate,DEP)为研究目标,以4-氨基邻苯二甲酸二乙酯为半抗原,通过重氮法偶联载体蛋白并免疫动物,制备针对DEP的特异性兔多克隆抗体.通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数,即包被抗原浓度为50 ng/mL,4℃环境下包被12h;抗体用T液稀释;药物缓冲液选用pH 5.4、0.005 mol/L的PBS缓冲液;酶标二抗用P液稀释,稀释度为1/3000;反应时间是:一抗∶二抗=30 min∶40 min.基于此建立了间接竞争化学发光酶联免疫法检测DEP.该方法对DEP的最低检测限(LOD)为3.09 ng/mL,检测范围(IC20～IC80)为5.93～42.03 ng/mL,半抑制浓度(ICs0)值为16.57 ng/mL,与14种结构类似物及功能类似物交叉反应均远低于0.5％,通过对白酒样品添加回收率的测定,证明了该方法的准确性,适用于白酒中DEP的快速检测.