呕吐毒素化学发光酶联免疫分析方法的建立及应用

摘要

建立增强化学发光酶联免疫分析定量检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的方法,并对实际样品进行检测.采用鲁米诺-双氧水-辣根过氧化物酶-对羟基联苯体系,在优化的条件下,用间接竞争法对DON进行测定,并与ELISA法、HPLC法(GB/T 23503-2009)进行比较.该方法在0.01～1 000 μg/mL范围内,所得DON线性回归方程为:y=-1 059.1X+40 892,相关系数为0.994 2,检测限为0.19 ng/mL,板内RSD为1.8％～4.5％(n=3),批内RSD为2.4％～7.4％(n=3),批间RSD为7.8％～11.0％(n=3);在小麦样品高、中、低3个浓度的回收率范围在90.0％～126.8％,在玉米样品高、中、低3个浓度的回收率范围在97.7％～ 110.0％.用此方法测定同属镰刀菌毒素的玉米赤霉烯酮交叉反应率小于10％,测定其他类菌种的真菌毒素几乎无交叉反应.所建立的增强化学发光酶联免疫分析法操作简单、灵敏度高、特异性强,可以用于实际样品中DON的快速测定.