N-糖基化改造碱性果胶酶的热稳定性

摘要

在软件模拟分析的基础上,运用半理性设计转换传统去除N-糖基化的方式,同时在反向转角区引入具有增强芳香族序列(enhanced aromatic sequence,EAS)特征的新N-糖基化,提高了碱性果胶酶(alkaline polygalac-turonate lyase,PGL)的热稳定性,获得了高品质的PGL工程菌.将355位点的苏氨酸突变成突变能低的色氨酸来去除353位点的N-糖基化,酶的半衰期提高了176％,但与目标值仍相距甚远;再将127和137位点同时引入新N-糖基化,使酶的半衰期达到1.35 h,与目标值接近.在酶的反向转角区引入具有EAS特征的新N-糖基化,对提高酶的热稳定性具有显著促进作用.