日本沼虾表皮蛋白-5基因全长cDNA克隆及表达分析

摘要

为探究甲壳动物表皮蛋白多样性及其功能,根据表皮转录组资料,利用RACE技术扩增得到日本沼虾表皮蛋白-5基因的cDNA全长序列,分析其生物信息学、不同蜕皮时期的表达特征以及KK-42对其表达特征的影响.日本沼虾表皮蛋白-5基因的cDNA全长796 bp,开放阅读框477 bp,编码158个氨基酸,含RR基序,预测蛋白等电点为4.22,分子量为16.46 ku;氨基酸序列比对发现日本沼虾表皮蛋白-5与克氏原螯虾Casp-2相似性最高,为76%,与其他甲壳动物表皮蛋白相似性为41%~53%.实时荧光定量PCR结果显示,日本沼虾表皮蛋白-5基因在3个时期——蜕皮间期、蜕皮前早期和蜕皮前晚期均有表达,其中在脱皮前晚期的相对表达量最高,为蜕皮间期的1400倍,与之有极显著差异(P<0.01).KK-42处理显著上调日本沼虾表皮蛋白-5基因在蜕皮前早期的表达,在处理后3、6 h和48 h表达量分别是对照组的6.3、4.8和11.4倍.K K-42诱导日本沼虾表皮蛋白-5基因的表达,使峰值前移,这可能是K K-42缩短日本沼虾幼虾蜕皮周期的机制之一.