黑眶蟾蜍卵母细胞体外成熟过程中生发泡迁移的研究

摘要

生发泡迁移（GVM）是大多数两栖类动物中卵母细胞成熟之前可以观察到的、涉及细胞核行为的现象。本实验在光镜水平上对激素诱导下的黑眶蟾蜍卵母细胞的GVM现象，以及细胞骨架解聚剂类药物－秋水仙素、细胞松驰B（CB）对这种激素诱导作用的影响进行了研究。同时，采用AZAN染色法观察了GVM过程中生发泡周边纤维骨架的结构变化。将取自刚脱离冬期雌体的卵母细胞按不同的培养液、分三个实验组，体外培养不同的时间后，固定、染色、观察。对照组培养液成分为Ringer液中加入人绒毛膜促性腺激素和脑垂体；实验组分别增加秋水仙素或CB。Tab.1和PlateI-1，4，5，6，7，8，9表明：经过体外培养4h，各组生发泡均向动物极表面发生了迁移。但是，秋水仙素的作用在培养的前2h，对GVM表现为促进效应（PlateI-5)；而培养的后2h，却表现为抑制（PlateI-8)；CB的作用始终是抑制（PlateI6&9)。6h后，各组生发泡均告破裂（PlateI－10，11，12）。正常情况下，生发泡周围被一环形纤维包围，其外侧有两个纤维化小体（PlateI-2)。发育较快者，纤维化小体消失，植物极附纤维逐渐加厚（PlateI-2)。培养4h后，成为一纤维网络（Plate Ⅱ－1）。秋水仙素组，网络上层犹在，下层消失（PlateⅡ－2）。CB组的下层紊乱。上层消失（PlateⅡ－3）。在微分干涉显微镜下可见：纤维网络由上下相互垂直的两部分纤维组成（PlateⅡ-4)。推测：生发泡被微管类纤维网络“锚定”于动物半球，激素或秋水仙素使微管解聚，有利于GVM；CB有利于微丝生成，增强了微管的网络“锚定”作用。秋水仙素的两种作用反映了GVM需要不同的骨架。生发泡周围可能存在微管、微丝满足了这种需要。