布氏杆菌微滴数字PCR方法的建立

摘要

为建立一种布氏杆菌微滴数字PCR qPCR方法,对布氏杆菌病的定量诊断提供技术支持,在实时荧光PCR(qPCR)检测方法(T/CVMA 20—2020)的基础上,建立了布氏杆菌微滴数字PCR方法,并对方法的反应条件进行了优化,同时对其敏感性、特异性、重复性进行了评估。结果显示:本方法的最低检测下限为2.6 copies/μL,未发现与常见的5种细菌存在交叉反应,重复性检测的变异系数小于5%;采用该微滴数字PCR和实时荧光PCR检测方法分别对76份流产牛的阴道拭子进行检测,显示该微滴数字PCR比qPCR可以多检出3份阳性样品。本研究建立的微滴数字PCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,适用于临床样品的布氏杆菌核酸检测。