K562细胞红系分化过程中miR-451表达的变化

摘要

目的:观察K562细胞红系分化过程中miR-451表达的变化,探讨miR-451在红细胞(RBC)形成过程中的作用。方法:应用Northern印迹法分析小鼠不同组织细胞(肝、骨髓、红细胞、白细胞)及人RBC、鸡RBC中miR-451的表达情况。采用氯高铁血红素(hemin,50μmol/L)诱导K562细胞红系分化,诱导36 h后应用联苯胺染色及血红蛋白mRNA RT—PCR鉴定K562细胞红系分化结果。采用Northern印迹法及茎环RT—PCR分析K562细胞经hemin诱导不同时间点(24、48、72、96 h) miR-451表达的变化。结果:除红细胞外,小鼠白细胞、肝脏及骨髓Northern印迹均未检测到miR-451表达;人RBC及具有细胞核的鸡RBC亦检测到miR-451表达。小鼠及人RBC检测到2种miR-451,发现了1条较Sanger中心报道的序列3’端多1个尿嘧啶的miR-451序列。50μmol/L hemin诱导后K562细胞出现红系分化,与诱导前相比.诱导36 h后联苯胺染色阳性细胞增多(P<0.05),γ、δ及ε血红蛋白表达增加(P<0.05)。Northern印迹未能检测到K562细胞诱导前后miR-451表达变化,但更敏感的茎环RT—PCR分析显示,诱导前K562细胞本身低丰度表达miR-451,hemin诱导24 h后。miR-451表达丰度开始增加,随着血红蛋白(δ-globin)表达增加,miR-451表达进一步增加,72 h达高峰。结论:miR-451是红系分化终末特异高表达的miRNA.在人及小鼠RBC中均存在相差1个碱基的2种序列。其在K562细胞红系分化过程中表达升高。