抗AIF单链抗体的构建与高效表达

摘要

目的获得具有生物活性的抗酸性同功铁蛋白(AIF)单链抗体。方法利用重组噬菌体抗体库技术从杂交瘤细胞4c9中分别克隆小鼠抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,成功构建AIF4c9scFv基因,并将其亚克隆于原核表达载体pET28a,转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达产物经镍鏊合层析柱复性后,用ELISA和Westernblotting检测表达蛋白与AIF的结合特性。结果AIF4c9scFv表达蛋白在细胞质中主要以不溶性包涵体形式存在,优化后的柱内复性程序可从高浓度的包涵体变性蛋白中高效复性AIF4c9scFv表达蛋白,其回收率可达75%左右。AIF4c9scFv复性蛋白可特异识别AIF抗原,具有良好的AIF抗体活性,其亲和力常数(KDscFv)为7.29×10-8mol/L。表达菌体的功能性AIF4c9scFv抗体产量约为62mg/L。结论在大肠杆菌中高效表达的抗AIFScfv经柱内复性后具有较好的生物学活性。