过氧化氢体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡的实验观察

摘要

目的探讨过氧化氢(H2O2)体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡。方法体外培养细粒棘球蚴原头节,实验分为2组,即RPMI1640组及RPMI1640添加谷氨酰胺组。分别用不同浓度的H2O2诱导,使其发生细胞凋亡。用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术(TUNEL法)检测凋亡细胞;用过氧化物酶标记链酶卵白素(SP)染色-免疫组化法检测半胱天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)以及FAS基因蛋白(跨膜蛋白Fas)表达情况。表达产物用二氨基联苯胺(DAB)显色,苏木素复染。TUNEL反应以细胞核黄染者为阳性细胞,caspase-1和cas-pase-3以细胞浆被染成棕黄色为阳性细胞,Fas以细胞膜和细胞浆被染成棕黄色为阳性细胞,无黄染者为阴性细胞。根据每个原头节中阳性细胞数所占百分比,对原头节阳性表达程度分为4个级别,即原头节中阳性细胞数50%为"+++"。实验重复2次。各组均设空白对照组。结果RPMI1640组,1mmol/LH2O2诱导12h,查见典型的TUNEL反应阳性细胞;诱导4h,caspase-1表达86.6%为"+～++",cas-pase-3表达77.8%为"+～++";诱导8h,caspase-1表达86.6%为"+～++",caspase-3表达80.0%为"+～++"。均比对照组明显增加(P<0.05)。而5mmol/LH2O2诱导4h,caspase-1表达93.0%为"++～+++",caspase-3表达89.5%为"+～++";诱导8h,caspase-1表达"++～+++"降为53.2%,caspase-3表达"+～++"降为48.4%且阴性表达为46.8%,降低显著(P<0.01)。添加谷氨酰胺(终浓度为2mmol/L)组,5mmol/LH2O2诱导8h,caspase-3 100%为"++～+++"高度阳性表达。与平行的RPMI1640组(caspase-3表达"++～+++"为32.2%,且阴性表达为46.8%)相比,变化明显。原头节在对照组和诱导组均可见Fas阳性表达细胞,RPMI1640组5mmol/LH2O2诱导4h,"+～++"表达为53.0%,对照组为20.0%;RPMI1640添加谷氨酰胺组5mmol/LH2O2诱导8h,"+～++"表达为88.7%,对照组为71.4%,诱导后均有所增加(P<0.05)。结论H2O2可诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡。