阿胶肽图前处理胶原蛋白酶解条件研究

摘要

目的:建立标准化的阿胶蛋白酶解条件。方法:分别通过加热法、超声法及液氮碾磨法提取阿胶蛋白;通过二氯甲烷-环己烷萃取和超滤法纯化阿胶蛋白;采用序列分析级胰酶进行酶解,分别考察4个酶解参数(温度、时间、酶的剂量和pH值)对酶解结果的影响,通过Tricine-SDS-PAGE法检测酶解效果。结果:超声法溶解阿胶样品效果相对较好,酶解参数最佳条件为:酶解温度38℃,pH 8. 0,酶解时间12 h以上,底物与酶体积比在4:1~1:1范围内,计算酶活为0. 1~0. 4 mU (mg/μmol)。结论:建立了标准化的阿胶肽图前处理胶原蛋白胰酶酶解条件,为基于肽图谱法阿胶鉴别及质量控制方法的建立打下基础。