高效液相色谱仪柱后反应分析氨基酸

摘要

蛋白质、肽和氨基酸的分析在研究蛋白质或肽的结构与功能中是不可缺少的重要环节和必要的化学基础。HPLC 柱后反应技术开发为蛋白质化学、酶化学和氨基酸化学的研究开辟了引人注目的前景,其中HPLC 柱后自动反应分析氨基酸的组装仪器已有商售品[1][2]。自70年代末商售氨基酸自动分析仪问世以来,氨基酸的分析可获较满意的结果,但仪器昂贵,又因专一性限制了对其它物质的分析,因而一些色谱研究家致力于应用HPLC 离子交换法和反相法分析氨基酸,研究指出,除色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸外,其他氨基酸不具天然萤光而且形紫外区吸收很弱。示差折射又由于灵敏度差,也难应用于实践。为了解决这一问题,通常对氨基酸进行柱前或柱后反应以进行定性及定量测定[2][3][4][5][6][7][8]。本文拟比较这两种反应方式并重点介绍HPLC 柱后反应。柱前反应:氨基酸在进入色谱柱之前与试剂进行反应产生衍生物称之。如生成PTH 氨基酸,用紫外检测器鉴定;与丹磺酰氯和邻一苯二甲醛(OPA)等试剂反应后产生萤光衍生物,用萤光检测器鉴定。其优点是柱前反应很少受反应条件限制,即溶剂、PH和时间等条件。缺点是比较难于自动化,柱前反应衍生物要求高效柱和选择性高的流动相。