血管基膜衍生多功能肽基因克隆、表达及空间构象分析

摘要

目的 :构建血管基膜衍生多功能肽克隆和原核表达载体 ,并对血管基膜衍生多功能肽氨基酸序列进行空间结构分析预测。方法 :用人源性IgG3上游铰链区连接肽连接的Tumstatin的 2个功能区片段 ,即血管基膜衍生多功能肽 (VB MDMP) ,利用合成的 3条长引物片段 ,进行PCR扩增。克隆到 pUC19载体 ,酶切和测序鉴定。亚克隆构建原核表达载体pGEX 4T 1 VBMDMP ,IPTG诱导表达 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表达产物。用GlutathioneSepharose 4B层析柱进行了亲和层析鉴定。将VBMDMP序列输入计算机 ,利用Antheprot软件分析。 结果 :血管基膜衍生多功能肽 (VBMDMP)基因经限制性内切酶酶切和测序鉴定 ,其大小和核苷酸序列正确 ,与设计完全一致。获得了原核表达融合蛋白GST VBMDMP。Anthep rot分析显示 ,人IgG3上游铰链区连接后的Tumstatin的 2个功能区域能自由伸展。 结论 :成功构建了血管基膜衍生多功能肽克隆和原核表达载体 ,并对其进行了空间结构分析。