血管基膜衍生多功能肽在大肠杆菌中的表达及抗肿瘤活性的测定

摘要

目的构建血管基膜衍生多功能肽(VBMDMP)原核表达载体、诱导表达GST-VBMDMP融合蛋白,观察其对Lewis肺癌自发转移瘤模型的影响.方法人工合成VBMDMP DNA序列(人源性IgG3上游铰链区连接肽连接的Tumstatin的两个功能区获得性肽基因序列),构建克隆载体PUC19-VBMDMP,亚克隆到Pgex-4T-1原核表达载体上,经测序和酶切分析鉴定获得了未发生移码突变的PGEX-4T-1-VBMDMP融合载体质粒.转化入大肠杆菌后,用IPTG诱导表达融合蛋白.Glutathione sepharose 4B层析柱纯化蛋白表达产物.采用Lewis肺癌自发转移瘤模型,检测VBMDMP的抗肿瘤作用.结果成功的构建pUC19-VBMDMP克隆和pGEX-4T-1-VBMDMP表达载体,在大肠杆菌获得稳定表达,用Glutathione sepharose 4B层析柱获得纯化的GST-VBMDMP融合蛋白.VBMDMP(GST-VBMDMP 10、6、2 mg*kg-1)对小鼠Lewis肺癌原发瘤具有抑制作用(瘤重抑制率分别为95.5%, 80.4%, 60.05%).VBMDMP(GST-VBMDMP10,6,2 mg*kg-1)对小鼠Lewis肺癌自发性肺转移具有抑制作用(自发性肺转移瘤结节抑制率分别为94.8%,86.4%,73.9%).结论VBMDMP对小鼠Lewis肺癌原发瘤和肺转移具有抑制作用.