超氧化物歧化酶基因突变在大肠埃希菌中表达

摘要

目的　在克隆人源铜锌超氧化物歧化酶基因 (hCu ,Zn -SOD)的基础上 ,对hCu ,Zn -SOD进行定点突变 ,使其在E .coliDH5α中表达 ,为进一步改造hCu ,Zn -SOD基因奠定基础。方法　首先构建质粒 pESOD ,然后用定点突变技术把其中hCu ,Zn -SOD的Cys111密码子突变为Ala111密码子 ,再与 pUCMT1相连接 ,构建表达载体pE SODT111,使其在E .coliDH5α中表达 ,表达产物用改良的邻苯三酚法和Westem杂交测定。结果　hCu ,Zn -SOD突变后在E .coliDH5α中成功表达 ,表达产物具有SOD活性 ,活力为 16 4 4 7U/ml培养液。结论　hCu ,Zn -SOD基因经过定点突变后构建的表达载体可在DH5n中表达 ,表达产物同样具有天然的hCu ,Zn