先天性心脏病患儿骨髓单核细胞分离培养内皮祖细胞的实验研究

摘要

目的探索自先天性心脏病患儿骨髓单核细胞中分离培养内皮祖细胞的方法,期望为儿童组织工程血管、补片或带瓣管道的制备找到新的种子细胞来源。方法采集先天性心脏病患儿骨髓,梯度密度离心法分离单核细胞,内皮细胞培养液EGM-2培养,种植于提前包埋了纤维连接蛋白的培养皿进行体外扩增,取48h后贴壁细胞,应用免疫组织化学和免疫荧光技术鉴定内皮细胞系列标志:CD34、CD31、FLK-1、ve-Cadherin和Ⅷ因子。结果经过梯度密度离心和贴壁法选择的细胞表达内皮细胞特异性抗原:CD34、CD31、FLK-1、ve-Cadherin和Ⅷ因子。培养至第5代细胞形态基本相似,细胞总数可以达到108以上。结论自先天性心脏病患儿骨髓单核细胞中可以分离培养出内皮祖细胞并能体外扩增,可以作为先天性心脏病患儿构建组织工程血管的种子细胞来源。