恙虫病东方体蛋白基因的原核表达及活性鉴定

摘要

目的　对恙虫病东方体Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白基因进行原核表达 ,并对表达产物进行纯化 ,以获得有生物活性的重组蛋白 ,用于恙虫病诊断试剂的研制。方法　根据Gilliam株东方体 5 6kDa蛋白基因序列设计特定引物 ,用PCR法扩增出编码 5 6kDa抗原长约 132 0bp的DNA ,克隆至原核载体PET2 8a ,构建了表达载体PET -OTG ,并获表达。表达产物经镍 (Ni2 +)柱亲和层析纯化 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)及蛋白印迹 (Western -blot)分析鉴定 ,并用间接ELISA进行抗原性分析。结果　SDS -PAGE检测表明重组蛋白分别以可溶性蛋白和包涵体两种方式表达 ,在相对分子质量约 5 2kDa处有表达目的条带。经Ni2 + 层析柱纯化得到目的蛋白 ,包涵体蛋白纯化后纯度大于可溶性蛋白 ,达电泳纯。Western -blot证实该蛋白能被患者阳性血清所识别 ,用阴性血清则未出现相应印迹。间接ELISA结果表明重组蛋白具有良好的抗原性 ,能有效区分恙虫病阳性和阴性血清。结论　重组蛋白具有免疫反应活性 ,有望作为诊断抗原用于恙虫病的诊断。