恙虫病东方体Gilliam株56kDa蛋白部分基因的原核表达及初步鉴定

摘要

目的对恙虫病东方体Gilliam株56kDa蛋白部分基因进行原核表达,以获得高效表达、有生物活性目的蛋白,为恙虫病诊断试剂的研制打下基础.方法根据Gilliam株东方体56kDa蛋白基因序列设计特定引物,用PCR法扩增出编码56kDa抗原富含亲水区及同源性高的C端一段长约700bp的DNA,插入原核载体PGEX-4T-2,转化大肠杆菌TGI,抽提质粒,酶切鉴定,含插入片段的重组质粒进行序列分析,再转化表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用SDS-PAGE及Western-blot进行分析鉴定.结果SDS-PAGE检测表明该截短片段以融合蛋白的方式得到成功表达,在相对分子量58kDa处有表达条带,经薄层扫描分析,目的蛋白条带占全菌蛋白的30.5%.Western-blot证实该融合蛋白能被恙虫病患者阳性血清识别.结论表达产物初步鉴定具有生物活性,有望应用于恙虫病诊断试剂的研制.