恙虫病东方体

摘要： 目的建立基于“染料-蜡丸”的目视LAMP检测恙螨中恙虫病东方体的方法,为恙虫病的防治提供新工具。方法选择Ot GroEL基因作为检测靶序列,在线设计并合成LAMP引物。构建r Ot-GroEL重组质粒作为阳性对照。建立基于SYBR Green I的“染料-蜡丸”目视LAMP,并联合便携式LAMP仪使其利于现场应用。结果新设计的引物针对Ot GroEL基因的237 bp靶区域,所构建的重组质粒r Ot-GroEL测序结果正确。在便携式LAMP仪上运用“染料-蜡丸”目视LAMP法,其检测下限为1×10^2拷贝质粒。结论成功建立了一种可与便携式LAMP仪联合使用的检测恙螨体内恙虫病东方体的“染料-蜡丸”目视LAMP法。

摘要： 目的 建立基于"染料-蜡丸"的目视LAMP检测恙螨中恙虫病东方体的方法,为恙虫病的防治提供新工具.方法 选择Ot GroEL基因作为检测靶序列,在线设计并合成LAMP引物.构建rOt-GroEL重组质粒作为阳性对照.建立基于SYBR Green I的"染料-蜡丸"目视LAMP,并联合便携式LAMP仪使其利于现场应用.结果 新设计的引物针对Ot GroEL基因的237 bp靶区域,所构建的重组质粒rOt-GroEL测序结果正确.在便携式LAMP仪上运用"染料-蜡丸"目视LAMP法,其检测下限为1×102拷贝质粒.结论 成功建立了一种可与便携式LAMP仪联合使用的检测恙螨体内恙虫病东方体的"染料-蜡丸"目视LAMP法.

摘要： 目的:分析2012—2017年佛山市恙虫病东方体优势株感染特征及重症患者的影响因素.方法:回顾性分析在佛山市第一人民医院接受治疗的恙虫病例的临床资料,于2012年1月—2017年12月选取408例患者作为实验对象,分析恙虫病东方体优势株感染特征及重症患者的影响因素.结果:408例患者年龄分布中,>40岁最多,占比82.60％,≤40岁占比17.40％,差异有统计学意义(P<0.05);职业分布中农民占比最高,为51.47％,显著高于其他职业(P<0.05);发病季节分布中秋季占比最高,为68.38％,显著高于春、夏、冬季(P<0.05);文化程度分布中小学及小学以下占比最高,为74.51％,显著高于其他学历(P<0.05).408例患者中个人卫生习惯较差、野外活动次数频繁、田间作业频繁、发病前存在昆虫叮咬史、家中有鼠类活动是影响患恙虫病的主要因素.结论:2012—2017年佛山市恙虫病东方体优势株感染患者多为中老年人,职业多为农民,发病季节多在秋季,文化程度较低,患者普遍存在较差的个人卫生习惯、野外活动或田间劳作的次数多、发病前存在昆虫叮咬史等是重症患者的重要影响因素.

摘要： 目的 调查江西省部分县区啮齿动物携带的立克次体.方法 在江西省南丰县、铜鼓县、上犹县、浮梁县、上高县、上饶市广信区捕获啮齿动物,运用形态学结合分子生物学方法鉴定其种类.采用巢式PCR方法检测捕获的啮齿动物的脾脏组织样本中的柯克斯体属、斑点热群、东方体属和无形体属立克次体.结果 捕获啮齿动物6种共393只,包括黑线姬鼠、褐家鼠、黄毛鼠、黄胸鼠、社鼠和臭鼩睛,黑线姬鼠为优势鼠种(311/393).从19只黑线姬鼠检出柯克斯体(6.11％),从2只黑线姬鼠检出东方体(0.64％),从1只黑线姬鼠检出斑点热群立克次体(0.32％).对扩增阳性基因片段测序和对获得基因序列做同源性比对,结果浮梁县黑线姬鼠检出新塔拉萨维奇立克次体、恙虫病东方体、贝氏柯克斯体;铜鼓县和上饶市广信区黑线姬鼠检出贝氏柯克斯体;南丰县黑线姬鼠检出恙虫病东方体.除黑线姬鼠外,其它5种啮齿动物均未检出立克次体.结论 江西省部分地区的黑线姬鼠携带贝氏柯克斯体、新塔拉萨维奇立克次体、恙虫病东方体等立克次体病原体,人群存在相关立克次体感染的风险,疾控和医疗机构应加强立克次体病的监测.

摘要： 恙虫病是经恙螨叮咬传播,由恙虫病东方体感染引起的一种致命性自然疫源性疾病,以发热、焦痂或溃疡、淋巴结肿大及皮疹为主要临床特征,主要流行于东亚和东南亚地区.恙虫病的临床症状不典型,极易造成误诊和漏诊.精确和快速的实验室诊断对于恙虫病的确诊和治疗具有非常重要的意义.本文对恙虫病常用实验室诊断方法及近年来的研究进展进行综述.

摘要： 目的 了解浙江省台州市农村地区鼠形动物自然感染4种常见病原体的情况,为鼠传疾病防制提供依据.方法 2020年9-12月在台州市三门县和天台县农村地区用夹(笼)夜法捕获鼠形动物,所获标本分别经分类鉴定和登记后,无菌操作采集鼠肝、脾、肺、肾等样本,应用实时荧光定量PCR法检测汉坦病毒、新型布尼亚病毒、钩端螺旋体、恙虫病东方体4种病原体.结果 在2个县监测点共捕获鼠形动物7种167只,总捕获率为6.13％,其中黑线姬鼠(84只,50.30％)、黄毛鼠(31只,18.56％)、褐家鼠(25只,14.97％)为优势鼠种,2个县鼠种构成相似.167份组织样本中钩端螺旋体阳性18份(10.78％),汉坦病毒阳性1份(0.60％),恙虫病东方体阳性2份(1.20％),新型布尼亚病毒未检出.从褐家鼠、黑线姬鼠、黄胸鼠、黄毛鼠中均有检出钩端螺旋体,其阳性率分别为8.00％、14.29％、14.29％、9.68％,差异无统计学意义.仅从黑线姬鼠中检出汉坦病毒,仅从黄毛鼠中检出恙虫病东方体.白腹巨鼠、小家鼠、臭鼩鼱中未检出4种病原体.黑线姬鼠中存在钩端螺旋体和汉坦病毒混合感染,混合感染率为0.60％(1/167).结论 台州市农村地区鼠形动物中存在多种病原体感染,不同鼠种病原体检出率不同,需进一步加强鼠传疾病防制,降低人群感染风险.

摘要： 为制备恙虫病东方体SJ2株基因重组抗原和恙虫病血清学诊断备选抗原,根据恙虫病东方体56 kDa外膜蛋白基因序列设计特异性引物,经PCR扩增东方体SJ2株56 kDa型蛋白羧基端部分基因,序列测定并用软件Bioedit与我国主要东方体流行株56kDa蛋白进行氨基酸序列比对分析.然后克隆至载体pET-28a并在BL21菌体中诱导表达,通过His镍柱纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western-blot鉴定分析.结果显示,成功扩增出恙虫病东方体SJ2株56 kDa蛋白708 bp基因片段,氨基酸序列比对显示,该截短蛋白含2个保守区和1个可变区.经IPTG诱导表达后,蛋白电泳在27 kDa处出现明显目标条带.Western-blot结果显示,该蛋白与恙虫病病人血清有特异性免疫反应,与正常人血清不反应.结果表明,诱导表达的重组56 kDa蛋白具有良好的免疫原性,可能备选为恙虫病诊断抗原用于恙虫病血清学检测.

摘要： 目的 研究恙虫病东方体感染对Tie2/Akt/Foxol通路的影响.方法 本研究应用新建立的小鼠和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)严重恙虫病东方体感染模型,在感染的不同时间点收集小鼠肺脏组织或细胞,用Western blot法检测Tie2/Akt/Foxol通路蛋白的表达,用RT-PCR法检测炎症因子mRNA的表达.结果 感染后,小鼠肺脏血管生成素2(Ang2)表达升高,而Tie2和磷酸化Tie2(p-Tie2)水平显著下降.感染HUVEC的检测结果支持小鼠实验结果,即Ang2升高,而Tie2和p-Tie2降低;添加重组人源血管生成素1(Angl)可以部分恢复Tie2的改变.进一步研究发现Tie2信号下游蛋白Akt磷酸化降低、Foxol去磷酸化增加;Foxol呈细胞核内积累,HMGB1及IFN-y等炎症因子表达增加.同时发现恙虫病东方体感染HUVEC后,血管内皮生长因子受体2及钙粘素等细胞通透性相关蛋白表达也同Tie2 一样降低.结论 恙虫病东方体感染抑制Tie2/Akt/Foxol信号的活化,而该信号在维持血管正常功能中起重要作用,提示Tie2可能是严重恙虫病治疗的一个潜在靶点.

摘要： 目的：探明山东恙虫病疫区病人、鼠、螨体内恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)流行株Sta56基因型别及序列特征。rn 方法：根据Ot-Sta56kD外膜蛋白基因部分序列设计群、型特异引物，采用Nested PCR技术进行检测、分型，将群引物扩增产物进行RFLP分析，并用双向测序法进序列测定。rn 结果：28株恙虫病东方体山东分离株提取的Ot-DNA群引物扩增产物经SnaB Ⅰ、Hha Ⅰ、Hinf Ⅰ酶切后呈现2种不同的RFLP图谱，经与巳知序列的Ot内切酶图谱相比，其中26份Ot内切酶图谱与日本地方株Kawasaki株具有相似的酶切图谱，但缺乏Hha I的酶切位点。该结果与Nested PCR基因分型的结果相一致。从这26份中选出B 16、FXS2株进行碱基序列测定，结果与Kawasaki型相应DNA片段的碱基序列同源性分别为94.22、95.21%，而与其它5株Ot同源性均少于75.87%，该片段的Hha I酶切位点GCGC变异为GTGC结构。另2株(FXS4，LHGM2株)与Karp参考株具有相同的酶切图谱;碱基序列测定结果，与Karp型相应DNA片段的碱基序列同源性分别为83.03、96.45%。rn 结论：山东恙虫病疫区病人、鼠、螨体内Ot流行株型属于日本Kawasaki型，但有一定的遗传学差异，山东恙虫病东方体Sta56基因Hha Ⅰ酶切位点GCGC变异为GTGC结构在鼠、螨间还存在Karp型Ot。

摘要： 目的：探明恙虫病病人皮肤焦痂内是否否有恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)DNA，病人皮肤焦痂能否作为分子生物学检测标本．方法：根据 Ot-Sta56kD外膜蛋白基因部分序列设计群、型特异引物，采用Nested PCR技术进行检测、分型．结果：4例恙虫病人皮肤焦痂提取的Ot-DNA经群引物扩增均阳性，Nested PCR基因分型的结果属于Kawasaki型．结论：恙虫病疫区病人皮肤焦痂内含有Ot-DNA，皮肤焦痂可作为检测Ot-DNA的标本，且检出率高．

摘要： 目的：探明山东恙虫病疫区病人、鼠、螨体内恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)流行株Sta56基因型别及序列特征．方法：根据Ot-Sta56kD外膜蛋白基因部分序列设计群、型特异引物，采用Nested PCR技术进行检测、分型，将群引物扩增产物进行RFLP分析，并用双向测序法进序列测定．结果：28株恙虫病东方体山东分离株提取的Ot-DNA群引物扩增产物经SnaB Ⅰ、HhaⅠ，HinfⅠ酶切后呈现2种不同的RFLP图谱，经与已知序列的Ot内切酶图谱相比，其中26份Ot内切酶图谱与日本地方株-Kawasaki株具有相似的酶切图谱，但缺乏Hha Ⅰ的酶切位点。该结果与Nested PCR基因分型的结果相一致．从这26份中选出B-16、FXS2株进行碱基序列测定，结果与Kawasaki型相应DNA片段的碱基序列同源性分别为94.22、95.21%，而与其它5株Ot同源性均少于75.87%，该片段的Hha Ⅰ酶切位点GCGC变异为GTGC结构．另2株(FXS4，LHGM2株)与Karp参考株具有相同的酶切图谱；碱基序列测定结果，与Karp型相应DNA片段的碱基序列同源性分别为83.03、96.45%．结论：山东恙虫病疫区病人、鼠、螨体内Ot流行株型属于日本Kawasaki型，但有一定的遗传学差异，山东恙虫病东方体Sta56基因Hha Ⅰ酶切位点GCGC变异为GTGC结构；在鼠、螨间还存在Karp型Ot．

摘要： 恙虫病东方体56kD抗原(Scrub typhus antigen,Sta56)作为恙虫病东方体表面含量最丰富的外膜蛋白,可占菌体总蛋白的10~15﹪;免疫原性强,最常被宿主免疫系统所识别;Sta56可与株特异性单抗和群特异性单抗反应,表明Sta56存在株特异性表位和群特异性表位,因而Sta56是恙虫病诊断抗原的主要候选者之一.本研究参照Karp株sta56基因序列自行设计合成数对引物,采用PCR从含有Karp株sta56的重组克隆扩增出编码含丰富亲水氨基酸区域的不同长度DNA片段并亚克隆进入两种表达载体,在大肠杆菌中进行表达.

摘要： 从广州市郊区恙虫病病人分离到恙虫病东方体,荧光免疫法和NEST PCR检测均呈阳性,NPCR株型检测证明该恙虫病人体内的恙虫病东方体是Karp株;病人血液接种BALB/c小鼠,接种后发病,NPCR法和腹膜涂片结果阳性.

摘要： 本发明公开一种可有效地适用于恙虫感染与否的诊断并作为恙虫疫苗进行使用的从TSA56抗原的保守序列导出的全新重组蛋白抗原以及使用上述重组蛋白抗原的疫苗组合物。

摘要： 本发明提供了用于检测恙虫病东方体的RPA检测方法，其专用引物、探针及其在恙虫病东方体检测中的用途。所述检测方法、其专用引物和探针是基于恙虫病东方体56kDa外膜蛋白基因保守序列设计，具有SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的寡核苷酸序列。本发明首次将新型恒温扩增技术RPA应用于恙虫病东方体的检测中，该方法模拟体内DNA复制的酶反应过程，依赖特定的酶和蛋白组合包括重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶，对DNA模板进行扩增，可在25‑43°C的恒温下实现特定核酸序列的扩增，扩增产物可通过侧向层析试纸条实现可视化判别。本发明具有高灵敏度、高特异性，且对硬件设备的要求很低，且反应时间短，无需对样品进行复杂处理、适合现场检测等优点，适于推广应用。

摘要： 本发明公布了一种莫氏立克次体及恙虫病东方体双重实时荧光定量PCR检测方法及检测体系，检测体系由引物、探针、TaqMan mix buffer、ddH

摘要： 本发明公开了一种杂交瘤细胞株5B3、恙虫病东方体56kDa蛋白单克隆抗体及其制备方法与应用，所述的杂交瘤细胞株5B3保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2022244。本发明提供的56kDa蛋白单克隆抗体腹水间接ELISA效价为1:1280000，抗体亚类为IgG2aκ，具有稳定分泌抗体的能力，特异性强，制备方法简单，其可以和东方体感染株发生反应，可作为诊断抗体用于免疫学快速检测方法的建立。

摘要： 本发明公开了一种检测恙虫病东方体抗体的荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用，所述试纸条包括硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜两端分别设有样品垫和吸水垫，所述样品垫、吸水垫和硝酸纤维素膜均置于底板上，其特征在于，所述硝酸纤维素膜设有检测线和控制线，所述检测线含有恙虫病东方体混合重组抗原，所述质控线含有兔抗恙虫病东方体多克隆抗体。本发明采用双抗原夹心法实现对恙虫病东方体抗体的检测，具有检测仪器成本低，操作简单，快速，稳定性好，特异型好，灵敏度高，实用性较强、容易保存、具有市场开发价值。

摘要： 一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增引物，所述引物筛选自Ot1序列，所述引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物具有SEQ ID NO.1序列特征，所述下游引物具有SEQ IDNO.2序列特征；一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增探针，所述探针筛选自Ot1序列，所述探针(Ot‑P)具有SEQ ID NO.3序列特征；一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增试剂盒，所述试剂盒包括引物和探针；应用一种恙虫病东方体核酸荧光等温扩增试剂盒的检测方法，包括以下步骤：S1：处理模板；S2：将模板、冻干酶粉、引物、探针、超纯水(Ultrapure water，UP水，电阻率达到18MΩ·cm)以及激活剂进行处理并在35‑41°C下反应20‑40分钟。引物和探针特异性强、敏感性高；本发明检测时间短、不需要大型昂贵的仪器及变温系统、在37°C、30分钟可完成核酸扩增、易于现场快速核酸检测及推广。

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，尤其是一种用于恙虫病东方体TSA蛋白诱导表达及大量纯化的方法，解决了现有技术中尚无较好的体外诱导以及大量表达恙虫病东方体相关蛋白的方法和相适应的条件的问题，所述用于恙虫病东方体TSA蛋白诱导表达及大量纯化的方法，包括引物合成、目的基因的获取与扩增、重组表达质粒的构建、恙虫病东方体相关蛋白的诱导表达、Western blot试验、重组蛋白表达形式分析、重组蛋白纯化等步骤。本发明设计了一种恙虫病东方体TSA蛋白获取的方法，通过探索调整蛋白诱导表达条件及蛋白纯化方法，成功体外诱导表达恙虫病东方体相关TSA蛋白，同时提高体外蛋白的纯度。

摘要： 本发明属于免疫荧光法检测技术领域，尤其是一种恙虫病东方体感染IgM抗体检测用免疫荧光法及其检测试剂盒，解决了现有技术中应用的巢氏PCR检测方法对实验仪器要求高、操作繁琐、耗时，扩增完成后需要通过电泳、显影等步骤对产物进行判别，不适合基层医院及现场快速检测的要求的问题，所述试剂盒由12个孔组成，每孔滴加2μL细胞悬液铺孔爬片，待孔内细胞悬浮液挥发后，用冷丙酮固定；将患者血清用PBS稀释后加入抗原片孔中，每片抗原片设置一孔做空白对照，同时设置阳性对照和阴性对照。本发明检测恙虫病东方体病原体的特异性及敏感性相对较高，检测准确率高、检测效率高，检测成本低。

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，尤其是一种用于恙虫病东方体47kDa蛋白的诱导表达及纯化方法，解决了现有技术中尚无较好的体外诱导以及大量表达恙虫病东方体相关蛋白的方法和相适应的条件的问题，所述用于恙虫病东方体47kDa蛋白的诱导表达及纯化方法，包括引物合成、目的基因的获取与扩增、重组表达质粒的构建、恙虫病东方体相关蛋白的诱导表达、Western blot试验、重组蛋白表达形式分析、重组蛋白纯化等步骤。本发明设计了一种恙虫病东方体47kDa蛋白获取的方法，通过探索调整蛋白诱导表达条件及蛋白纯化方法，成功体外诱导表达恙虫病东方体相关47kDa蛋白，同时提高体外蛋白的纯度，得到纯度＞85%。

摘要： 本发明提供了用于检测恙虫病东方体的RPA检测方法，其专用引物、探针及其在恙虫病东方体检测中的用途。所述检测方法、其专用引物和探针是基于恙虫病东方体56kDa外膜蛋白基因保守序列设计，具有SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的寡核苷酸序列。本发明首次将新型恒温扩增技术RPA应用于恙虫病东方体的检测中，该方法模拟体内DNA复制的酶反应过程，依赖特定的酶和蛋白组合包括重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶，对DNA模板进行扩增，可在25‑43°C的恒温下实现特定核酸序列的扩增，扩增产物可通过侧向层析试纸条实现可视化判别。本发明具有高灵敏度、高特异性，且对硬件设备的要求很低，且反应时间短，无需对样品进行复杂处理、适合现场检测等优点，适于推广应用。