人MAGE-1基因的克隆、原核表达及其抗体的制备

摘要

目的　获得MAGE 1蛋白 ,制备其多克隆抗体。方法　采用RT PCR方法从人肝细胞癌HepG2中克隆MAGE 1基因 ,构建其原核表达质粒 ,并进行原核表达与蛋白分离纯化。免疫动物 ,制备MAGE 1的抗血清。经固化GST蛋白的Sepharose 4B交叉吸收后 ,采用琼脂双扩实验和ELISA方法检测其效价和特异性。结果　所得MAGE 1cDNA序列与GeneBank中公布的一致。构建了MAGE 1194 - 30 9aa片段的原核表达质粒pGEX MAGE 1,经诱导及分离纯化 ,得到一Mr 约 4 2 0 0 0的融合蛋白。免疫动物 ,分离血清 ,经交叉吸收后 ,琼脂双扩及ELISA实验结果显示多克隆抗体能够与MAGE 1蛋白特异性结合。结论　本研究成功地获得MAGE 1蛋白 ,制备的抗MAGE 1多克隆抗体 ,经交叉吸收后能够特异性地与MAGE 1蛋白结合 ,为研究MAGE