猪卵透明带ZP3α真核表达载体的构建及体外瞬时表达

摘要

目的 :构建猪卵透明带ZP3α真核表达载体 ,为探讨卵透明带DNA疫苗避孕疫苗奠定基础。方法 :采用PCR法获得了去除N端信号肽序列和C端跨膜区序列的猪卵透明带ZP3α的cDNA序列片段 ,以专门用于发展DNA疫苗的质粒pVAX1为载体构建了真核细胞表达质粒pVAX1-pZP3α。通过脂质体转染将之导入HeLa细胞进行体外瞬时表达 ,然后采用RT -PCR和间接免疫荧光技术 (IIF)检测pZP3α在mRNA水平的转录和蛋白质水平上的表达。结果 :真核细胞表达质粒pVAX1-pZP3α构建成功 ,用RT -PCR和IIF技术检测到了pZP3α在HeLa细胞中的转录与表达。结论 :真核表达载体pVAX1-pZP3α的成功构建和表达为研制开发有效的人用卵透明带DNA避孕疫苗奠定了基础。