用RT-PCR快速检测血清中的登革热病毒及分型

摘要

目的：检测血清中的登革热（DF）病毒．并进行分型研究。方法：采用SiO2快速提取DF病毒RNA，用通用引物（D1～D4型）RT－PCR扩增方法，检测广东省1995年55份疑似DF患者急性期（1～7天）血清标本中的DF病毒RNA，并与病毒分离法相比较。结果；病毒分离阳性率为49．09％，RT－PCR的检出率为38．18％，敏感性为77．78％，特异性为100％，符合率为89．09％，两者差异无显著性（X2＝2．08，P＞0．05）。用通用引物扩增D1～D4型标准毒株和标本，出现511bp的扩增带，乙脑病毒不出现扩增带。用HinfⅠ、HaeⅢ、HincⅡ和Sau3aⅠ等4种限制性内切酶，对D1～D4型标准毒株的RT－PCR产物进行酶切分型，用琼脂糖电泳，结果HinfⅠ和HaeⅢ对D1～D4型均能酶切，Sau3aⅠ能酶切D1～D3型，HincⅡ能酶切D1和D4型。根据两种或以上的酶切结果，可以对DF病毒的型别作出鉴定。用这4种酶对5份标本进行酶切分型，结果与D1型标准毒株的电泳带型相同。结论：用本方法检出DF病毒的RNA仅需5～6小时，在2天内可以鉴定出型别，是诊断DF病毒感染的一种快速简单的方法。