抗人结肠癌单抗MC5的功能性ScFv在大肠杆菌中的可溶性表达(英文)

摘要

目的　制备抗人结肠癌单抗MC5的具功能活性的可溶性单链可变区片段 (ScFv)。方法　从分泌MC5的杂交瘤细胞分离mRNA ,RT PCR分别扩增抗体质量、轻链可变区基因 (VH和VLDNA) ,经linkerDNA连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,转化菌经辅助噬菌体M13KO7感染后 ,获得重组噬菌体。以高表达MC5结合抗原的人结肠癌细胞系SW4 80对重组噬菌体进行 2轮筛选后 ,经ELISA筛选呈现抗体ScFv片段的噬菌体单克隆。取 2个强阳性克隆的噬菌体感染大肠杆菌HB2 15 1,用于表达可溶性ScFv。经点印迹和Western印迹对可溶性ScFv进行鉴定 ,经ELISA检测可溶性ScFv的抗原结合活性。结果　所获得的VH、VL和ScFvDNA分别约为 340、32 0和 75 0bp。对重组噬菌体经 2轮亲和筛选后 ,经ELISA从 2 5个克隆中筛检出 10个抗原阳性克隆。源于 2个强阳性克隆的可溶性ScFv的分子质量为32 0 0 0u ,且浓集于细菌周质腔中 ,可溶性ScFv具有抗原结合活性 ,其结合位点与亲本单抗MC5相同。结论　针对MC5的具功能活性的可溶性ScFv的成功制备 ,为人结肠癌的体外 (乃至体内 )