基于TaqMan探针荧光PCR检测致泻性大肠埃希氏菌

摘要

建立快速检测致泻性大肠埃希氏菌的(DEC)方法,根据DEC的uidA(GenBank:JQ068101.1)、bfpB(Sequence:NG_034726.1)、eaeA(GenBank:AJ579305.1)、LT(GenBank:M17873.1)、ST(GenBank:M18346.1)、Stx1(GenBank:FR875155.1)、Stx2(GenBank:AB030484.1)、ipaH(GenBank:JQ638638.1)、aggR(GenBank:Z32523.1)设计引物和探针,建立基于TaqMan探针荧光PCR检测方法。用uidA基因检测所有DEC,A体系4个基因bfpB、eaeA、LT、ST检测EPEC和ETEC,B体系4个基因ipaH、Stx1、Stx2、aggR检测EIEC、STEC和EAEC,两个体系探针的5′端分别标记FAM、VIC、TET和ROX。试验结果表明,两个体系扩增效率89.6%~102.2%,线性相关系数R2在0.965~0.999范围,可准确鉴别出25株DEC型别,而70株非DEC扩增结果阴性。本研究所建立方法的特异性强,可准确检测EPEC、ETEC、EIEC、STEC和EAEC。