乙型肝炎相关性肝癌中Toll样受体4调控周期蛋白依赖激酶4/6对其增殖的影响

摘要

目的:探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)对乙型肝炎相关性肝癌细胞增殖的影响及作用机制.方法:Western blot法检测36例乙型肝炎相关性肝癌患者组织及相应癌旁组织中TLR4、周期蛋白依赖激酶(cyclindependent kinase,CDK)4和CDK6的蛋白表达水平,并分析癌组织中TLR4与CDK4,CDK6之间的关联性.构建3个特定干扰TLR4的siRNA序列和一个阴性对照序列,通过脂质体转染肝癌细胞Hep-3B,Western blot法筛选出最佳干扰序列.Western blot法检测转染前后肝癌细胞中TLR4、CDK4和CDK6的蛋白表达水平;MTT比色法、平板克隆形成实验检测干扰TLR4表达后肝癌细胞增殖能力.结果:在乙型肝炎相关性肝癌患者组织中,TLR4、CDK4和CDK6蛋白的总体表达水平高于相应癌旁组织(P<0.05),且TLR4分别与CDK4、CDK6的表达呈正相关性(r_1=0.66,r_2=0.57).成功构建并筛选出最佳干扰序列TLR4-siRNA-03.转染TLR4-siRNA-03后,与Control组相比,TLR4-siRNA组中CDK4、CDK6蛋白表达均随之降低(P<0.05),肝癌细胞Hep-3B的生长速度也明显下降(P<0.05),TLR4-siRNA组克隆形成率(18.77%±4.61%)也明显下降(P<0.05).结论:在乙型肝炎相关性肝癌中TLR4可能通过调控CDK4、CDK6来影响其增殖.