腺病毒介导的LacZ基因靶向性导入脊髓及示踪周围神经的动态过程

摘要

目的　由损伤的周围神经靶向性导入腺病毒介导的 L ac Z基因 (Ad L ac Z)至脊髓 ,动态观察病毒载体逆行输送到脊髓前角运动神经元、脊髓后根神经节 (dorsal root ganglia,DRGs)感觉神经元及基因产物顺行标记周围神经的全过程和特点。　方法　分别将 Ad L ac Z转染大鼠正中神经和胫神经近断端 ,然后以 10 - 0无创线吻合神经。在转染后 9周内的 2 4个不同时间点取出正中神经组的 C5～ T1 脊髓节段、DRGs连同臂丛 ,胫神经组的 L2 ～ L6 脊髓节段、DRGs连同骶丛。将脊髓和 DRGs的 5 0 μm横切片行 X- gal染色和免疫组织化学染色 ,臂丛和骶丛的整个标本分别行 X- gal染色。计数阳性脊髓前角运动神经元、DRGs神经元及周围神经轴突数 ,研究转基因表达在脊髓前角运动神经元、DRGs神经元及正中神经、胫神经的最早时间、高峰时间和持续时间。　结果　 L ac Z基因能特异性、高效表达在损伤周围神经的感觉和运动神经元。转基因在脊髓和周围神经的表达严格限于感染神经的同侧。正中神经组标本各部位的转基因表达均早于胫神经组。胫神经组被标记的运动神经元和感觉神经元数均高于正中神经组。表达持续的时间在运动神经元最短 ,然后是感觉神经元 ,在周围神经持续时间最长。在同一组内 ,转基因表达在 DRGs神经元最早 。