实时荧光定量RT-PCR检测犬乳腺肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)基因方法的建立及初步应用

摘要

为了准确地分析血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在犬乳腺肿瘤形成过程中的作用,试验设计了针对犬VEGF基因的特异性引物,提取乳腺肿瘤组织RNA并扩增出目的片段,将PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体,经质粒PCR扩增、酶切和测序鉴定重组质粒,构建标准曲线等,成功建立了乳腺肿瘤VEGF基因实时荧光定量PCR检测方法。运用实时荧光定量PCR检测了40例不同的犬乳腺肿瘤病例、2例正常乳腺组织。结果发现:在犬恶性乳腺肿瘤组织中,VEGF基因表达量明显高于良性乳腺肿瘤和正常乳腺组织(P0.05)。VEGF基因在犬乳腺癌组织中的表达量远高于其在正常乳腺和良性乳腺肿瘤组织中的表达,且与淋巴结是否发生转移相关。因此,VEGF可作为犬乳腺癌转移、复发的预测指标之一。